Eliminación de clorofila: técnicas para extractos de plantas puras (2025)

La eliminación de la clorofila de los extractos de plantas se puede hacer utilizando una variedad de métodos, que incluyen:

- Métodos de separación líquido-líquido o contracorriente (CCS)

- Extracción de fase sólida (SPE)

- Cromatografía de partición centrífuga (CPC)

- Uso de carbón

- Uso de hexano, acetato de etilo, metanol o etanol

Uso de hexanes-etoac-meoh-water (5: 5: 5: 5, v/v) en modo de extrusión de elución

En primer lugar, el material vegetal se tritura para obtener un producto natural triturado.

En segundo lugar, el producto natural triturado se sumerge en un disolvente mixto de alcohol y agua floral y se calienta o se establece a temperatura ambiente.

En tercer lugar, la solución obtenida se filtra y se concentra.

Cuarto, el alcohol y un disolvente mixto de una mezcla de agua espumante y un disolvente se agregan al concentrado y la mezcla se agita.

En quinto lugar, la solución se centrifugó y se elimina la solución de capa inferior que contiene clorofila.

Sexto, el alcohol y un disolvente mixto de una mezcla de agua y un agua se agregan al sobrenadante, concentrado y centrifugado para eliminar el sobrenadante que contiene el disolvente residual.

Finalmente, se obtiene la capa inferior de la que se ha eliminado la clorofila.

Este método se puede utilizar para producir un extracto natural del cual se ha eliminado la clorofila de un producto natural sin cambiar la estructura y el contenido de un componente útil en el producto natural.

Usando carbón

El carbón activado se deriva de fuentes naturales como las cáscaras de coco, la turba y la madera.Tiene una estructura porosa, con una gran distribución de diámetro de poro, lo que la hace muy efectiva para eliminar pigmentos como la clorofila.Sin embargo, esto también significa que puede eliminar los compuestos activos del extracto, reduciendo el rendimiento.Además, el carbón puede descomponerse con el tiempo y liberar cenizas que pueden contener metales pesados.Estos metales pueden contaminar el aceite si no se filtran correctamente.

Una alternativa al carbón activado es CarbonX, un producto de ingeniería que se deposita en un sustrato poroso.Este producto no se separa, por lo que no introducirá cenizas o partículas que son difíciles de filtrar.También se lava previamente para evitar la contaminación.

Uso de Diaion HP-2022–25

DIAion HP-2022–25 es una fase estacionaria ampliamente utilizada para eliminar la clorofila de los extractos de plantas.Es un tipo de resina de extracción de fase sólida (SPE) que se puede usar para eliminar selectivamente la clorofila y otros pigmentos de los extractos botánicos.Aquí hay una guía paso a paso sobre cómo usar DIAion HP-2022–25 para eliminar la clorofila de los extractos de plantas:

Paso 1: Prepare el extracto de la planta

Antes de usar Diaion HP-2022–25, deberá preparar su extracto de planta.Esto generalmente implica moler o homogeneizar el material vegetal, como las hojas, en un disolvente adecuado.Los solventes comunes utilizados para la extracción de clorofila incluyen acetona, etanol, metanol y hexano.Es importante elegir un solvente compatible con DIAion HP-2022–25 y no interferirá con los compuestos deseados.

Paso 2: condiciona la resina DIAion HP-2022–25

La resina debe estar acondicionada antes de usarse para eliminar cualquier impureza y garantizar un rendimiento óptimo.Esto generalmente se hace lavando la resina con un disolvente adecuado, como agua destilada o una solución de ácido o base diluida, seguido de enjuague con agua destilada.Se debe permitir que la resina se hinche por completo antes de su uso.

Paso 3: Cargue el extracto de la planta en la columna Diaion HP-2022–25

El extracto de la planta preparado se carga en una columna que contiene la resina HP-2022–25 acondicionada.El extracto debe pasar a través de la columna lentamente para permitir el máximo contacto entre el extracto y la resina.

Paso 4: Lave la columna

Después de cargar el extracto, la columna se lava con un disolvente adecuado, como agua destilada o una solución de ácido o base diluida, para eliminar las impurezas restantes y los compuestos no unidos.Este paso ayuda a garantizar que solo los compuestos deseados se conserven en la columna.

Paso 5: eluir los compuestos deseados

Una vez que se ha lavado la columna, los compuestos deseados se pueden eluir utilizando un disolvente apropiado.La elección del solvente de elución dependerá de las propiedades de los compuestos que está tratando de aislar.Las fracciones se recogen durante el proceso de elución, y la presencia de los compuestos deseados se puede confirmar utilizando técnicas analíticas como la cromatografía de capa delgada (TLC) o la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC).

Paso 6: Regenerar el DIAion HP-2022–25 Resina

Después de la elución, la resina Diaion HP-2022–25 se puede regenerar lavándola con un disolvente adecuado, como metanol o acetona, seguido de enjuague con agua destilada.Este paso ayuda a eliminar los compuestos restantes y prepara la resina para su reutilización.

Paso 7: Analice las fracciones eluidas

Las fracciones eluidas que contienen los compuestos deseados se pueden analizar utilizando varias técnicas, como TLC, HPLC o espectroscopía, para confirmar la presencia y la pureza de los compuestos.Este paso también puede implicar una mayor purificación o concentración de los compuestos, dependiendo de los requisitos específicos de su experimento.

Métodos de separación líquido-líquido o contracorriente (CCS)

Los métodos de separación líquido-líquido o contracorriente (CCS) han demostrado ser útiles para el aislamiento de grandes cantidades de compuestos objetivo de matrices complejas.Los métodos CCS son herramientas poderosas en la investigación de productos naturales debido a su relativa facilidad de uso, costo asequible, huella ambiental reducida y características de rendimiento.

CCS es un proceso de separación basado en los principios de extracción líquida-líquido, donde un compuesto químico se distribuye entre dos fases líquidas inmiscibles de acuerdo con su solubilidad relativa en las dos fases.CCS ofrece una alta carga de muestra, que compensa la resolución moderada.CCS a menudo se usa en combinación con otros métodos de separación, como la cristalización o la cromatografía de columna, para producir cannabinoides menores de alta pureza.

La tecnología CCS se puede encontrar en la industria como cromatografía de partición centrífuga (CPC) o cromatografía contracurrente (CC).CPC es una instrumentación hidrostática, mientras que CC es una instrumentación hidrodinámica.

Se ha demostrado que un sistema de solvente de hexanos-etoac-meoh-water (5: 5: 5: 5, v/v) en el modo de extrusión de elución es efectiva para la eliminación de clorofila de los extractos de plantas.Este sistema de solvente se utilizó con cromatografía de partición centrífuga (CPC) para eliminar de forma selectiva y eficiente la clorofila en un proceso de 45 minutos.El proceso se evaluó utilizando cuatro extractos diferentes preparados a partir de tres materiales vegetales bien caracterizados: Epimedium sagittatum (hojas), Senna Alexandrina (Hojas) y Trifolium pracense (partes aéreas).Se encontró que el método preserva adecuadamente la diversidad metabolómica y la integridad de los extractos originales.

El CPC 1000 Pro, desarrollado por Gilson, se ha utilizado para proporcionar un método rápido y reproducible para la purificación a gran escala del cannabidiol (CBD) de la planta de cannabis sativa.CCS se ha utilizado para separar los cannabinoides, con un enfoque en el CBD, de la resina pegajosa que se encuentra en la superficie de la planta.CCS es particularmente importante para evitar la contaminación con THC, el principal químico psicoactivo que se encuentra en el cannabis.

Uso de un sistema solvente compuesto de hexanos, acetato de etilo, MeOH y agua (5/5/5/5, v/v)

Para eliminar la clorofila del extracto de la planta, puede usar un sistema de solvente compuesto de hexanos, acetato de etilo, MeOH y agua (5/5/5/5, v/v).Este método se llama cromatografía de partición centrífuga (CPC) y se usa para separar y purificar sustancias.Es un tipo de método de separación de contracorriente (CCS), que es útil para aislar compuestos objetivo de matrices complejas.

• Prepare el sistema de solvente: mezclar hexanos, acetato de etilo, MeOH y agua en una relación 5: 5: 5: 5 (por volumen).Esto creará dos fases inmiscibles: una fase superior orgánica y una fase inferior acuosa.
• Disuelva el extracto de la planta: disuelva su extracto de planta en el sistema de solvente, asegurando que esté completamente disuelto sin partículas visibles.
• Separe las fases: permita que la solución se asiente y luego separe las fases superior e inferior.Los pigmentos de clorofila se concentrarán en la fase superior orgánica.
• Realice una partición líquida/líquida (opcional): si desea separar aún más la clorofila, puede realizar particiones líquidas/líquidas.Divida la solución en dos partes y recolecte volúmenes iguales de las fases superior e inferior en contenedores separados.La fase superior estará altamente enriquecida en clorofila.
• Separación de contracorriente (CCS): Cargue la columna CPC con la fase superior orgánica como fase estacionaria y la fase inferior acuosa como fase móvil.Ejecute el CPC en modo descendente a un caudal de 25 ml/min y una velocidad de rotación de 2500 rpm.
• Recoja las fracciones: durante la etapa de elución, recolecte las fracciones libres de clorofila (extractos de eliminación de clorofila).Durante la etapa de extrusión posterior, recolecte las fracciones que contienen los pigmentos de clorofila (fracciones enriquecidas con clorofila).
• Analice las fracciones: use técnicas como HPTLC, UHPLC-UV y espectroscopía de RMN 1H para analizar la composición fitoquímica de las fracciones y confirmar la eliminación de la clorofila.

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